- фрагмент ДНК с флуорохромной меткой.
ДНК-зонд представляет собой фрагмент одноцепочечной или денатурированной двуцепочечной ДНК, содержащий флуоресцентную метку и комплементарный исследуемой нуклеотидной последовательности. При проведении реакции гибридизации зонд связывается с мишенью по принципу комплементарности, после чего место расположения сигнала выявляют с помощью флуоресцентной микроскопии или автоматизированной системы регистрации.
Флуоресцентно меченные ДНК-зонды применяют в FISH-методе, сравнительной геномной гибридизации, молекулярной цитогенетике и некоторых вариантах ПЦР-диагностики. Последовательность длиной 20–25 нуклеотидов может быть олигонуклеотидным зондом, но сама по себе длина не является определяющим признаком. Участок узнавания рестрикционной эндонуклеазы характеризует сайт рестрикции, а не зонд; отдельные нуклеотиды и многомиллионные фрагменты генома также не соответствуют его диагностическому определению.
| Характеристика | ДНК-зонд |
|---|---|
| Основа | Фрагмент ДНК с последовательностью, комплементарной мишени |
| Метка | Флуорофор; также могут использоваться ферментные, радиоактивные или гаптеновые метки |
| Механизм действия | Специфическая гибридизация с целевой последовательностью нуклеиновой кислоты |
| Основные методы применения | FISH, Southern blot, микроматричный анализ, некоторые форматы ПЦР и гибридизационных тестов |
| Что определяет специфичность | Комплементарность последовательности, длина зонда, температура гибридизации и условия отмывки |
Выявленный флуоресцентный сигнал позволяет определить наличие, отсутствие, локализацию или относительное количество исследуемой последовательности ДНК.
Тесты с ответами для аттестации по специальности «лабораторная генетика».