- ДНК-лигазы;
Амплификация ДНК in vitro проводится в реакционной смеси, содержащей матричную ДНК, пару праймеров, дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (dNTP), термостабильную ДНК-полимеразу, ионы магния и буферный раствор. Ионы Mg2+ необходимы для каталитической активности полимеразы и образования фосфодиэфирных связей при присоединении нуклеотидов к растущей цепи.
ДНК-лигаза катализирует соединение фрагментов ДНК путем восстановления фосфодиэфирной связи между соседними нуклеотидами. Этот фермент применяется при клонировании, сборке рекомбинантных конструкций, репарации ДНК и некоторых методах молекулярной диагностики, но в стандартной полимеразной цепной реакции не требуется. Синтез новых цепей полностью обеспечивается ДНК-полимеразой, поэтому ДНК-лигаза не входит в состав реактивной смеси для амплификации.
| Компонент | Функция в реакции | Наличие в стандартной ПЦР-смеси |
|---|---|---|
| Матричная ДНК | Содержит амплифицируемую последовательность | Да |
| Праймеры | Определяют границы амплифицируемого фрагмента и служат стартовыми участками синтеза | Да |
| dNTP | Субстраты для построения новых цепей ДНК | Да |
| Термостабильная ДНК-полимераза | Катализирует синтез комплементарных цепей ДНК | Да |
| Ионы Mg2+ | Кофактор ДНК-полимеразы | Да |
| ДНК-лигаза | Соединяет фрагменты ДНК и запечатывает одноцепочечные разрывы | Нет |
Правильный ответ: ДНК-лигаза.
Тесты с ответами для аттестации по специальности «лабораторная генетика».