- разделения фрагментов ДНК по размеру под действием электрического тока;
ДНК имеет отрицательный заряд благодаря фосфатным группам сахарофосфатного остова, поэтому в электрическом поле перемещается к положительному электроду. При проведении электрофореза в агарозном геле его пористая структура действует как молекулярное сито: короткие фрагменты проходят через гель быстрее и на большее расстояние, чем длинные. После окрашивания или флуоресцентной детекции фрагменты визуализируют в виде полос и сравнивают с маркером молекулярной массы.
Метод применяют для оценки размера и целостности ампликонов после ПЦР, анализа продуктов рестрикции, выявления делеций, вставок и некоторых вариантов длины ДНК. Нуклеотидную последовательность устанавливают методами секвенирования, количество вирусных частиц — методами количественной ПЦР или цифровой ПЦР, активность ферментов — биохимическими тестами, а кариотип — цитогенетическим исследованием метафазных хромосом.
| Метод | Основной объект исследования | Что определяют |
|---|---|---|
| Электрофорез в агарозном геле | Фрагменты ДНК и РНК | Размер, количество полос, целостность и примерную концентрацию фрагментов |
| Капиллярный электрофорез | Флуоресцентно меченые фрагменты ДНК | Размер аллелей, фрагментный профиль, результаты некоторых видов генотипирования |
| Секвенирование | Молекула ДНК | Последовательность нуклеотидов |
| Кариотипирование | Метафазные хромосомы | Числовые и крупные структурные хромосомные аномалии |
Диагностическая ценность электрофореграммы зависит от правильного подбора концентрации геля, напряжения, времени миграции и молекулярного маркера.
Тесты с ответами по специальности «лабораторная генетика» для аттестации на категорию.